UPTD Puskesmas Ambarawa terletak di Kecamatan Ambarawa, Kabupaten Semarang, Provinsi Jawa Tengah. Luas wilayah kerja 28.22 km2. Terdiri dari 8 kelurahan dan 2 desa yaitu Kelurahan Kranggan, Kelurahan Lodoyong,Kelurahan Kupang,Kelurahan Panjang,Kelurahan Ngampin,Kelurahan Pojoksari, Kelurahan Tambakboyo, Kelurahan Baran, Desa Bejalen dan Desa Pasekan. Puskesmas Ambarawa terletak di Kecamatan Ambarawa, tepatnya di Desa Kupang, dengan batas sebagai berikut :
- Sebelah utara : Kec. Bandungan, Kabupaten Semarang
- Sebelah selatan : Kec. Banyubiru, Kabupaten Semarang
- Sebelah timur : Kec. Bawen, Kabupaten Semarang
- Sebelah barat : Kec. Jambu, Kabupaten Semarang
